产品货号:
QN4083
中文名称:
琼脂糖凝胶4FF
英文名称:
Sepharose 4FF
产品规格:
100ml|500ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
琼脂糖凝胶4FF是在琼脂糖凝胶4B的基础上经过两次交联形成的高交联基质,微球的化学稳定性及物理性能显著增强,刚性增加,流速更快,使产品处理时间大大缩短。可用于生物大分子的凝胶层析。本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
理化指标:
*检测条件:层析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃,流动相为0.1mol/LNaCl
贮存:产品应密封贮存在4~25℃(保存溶液为20%乙醇),通风、干燥、清洁的地方,不能冷冻,用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。
注意事项:本品应避免与氧化剂接触,避免长时间暴露在空气中。运输中应避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
使用方法:
1.装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
② 选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。
⑥ 最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
2.平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3.上样
① 样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
② 介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
③ 上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
4.洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5.再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
6.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
7.在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。
8.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干气泡进入。
9.去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:
① 2倍柱体积的70%乙醇;
② 2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5;
③ 1倍柱体积4M尿素;
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
10.消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
注意:上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
相关搜索:琼脂糖凝胶4FF,Sepharose 4FF
本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点,非特异性吸附低,回收率高,可用有机溶剂及1~2mol/L的NaOH在位清洗,适用于工业规模生产,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。
理化指标:
项目 | 指标 |
基质 | 4%交联琼脂糖 |
排阻极限 | 6×104~2×107(球蛋白) |
形状 | 球形 |
粒径 | 45~165μm |
最高流速 | 300cm/h* |
耐压 | 0.30 MPa |
pH适用范围 | 2~14(短时间,在位清洗),2~12(长时间) |
化学稳定性 | 以下溶液中40℃下稳定: 2mol/L NaOH; 70%EtOH; 30%异丙醇; 30%乙腈; 1%SDS; 6mol/L盐酸胍; 8mol/L尿素 |
贮存:产品应密封贮存在4~25℃(保存溶液为20%乙醇),通风、干燥、清洁的地方,不能冷冻,用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。
注意事项:本品应避免与氧化剂接触,避免长时间暴露在空气中。运输中应避免日晒、雨淋、重压,严禁与有毒、有害物品混运。
使用方法:
1.装柱
凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高,为了保证分离效果,一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶,或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子,可在柱床稳定后将柱床压紧,接好管路。
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。
② 选择一根一定直径的柱子,长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用缓冲液(按凝胶:缓冲液=3:1的比例)配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口,使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过,使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子,到柱床稳定。
⑥ 最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平,上好柱头。
2.平衡
让缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和pH不变。
3.上样
① 样品用缓冲液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理,再上样。
② 介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的,分子量大的先流出来。
③ 上样体积约为柱体积的1~2%,越小分离越好。
4.洗脱
用缓冲液洗脱,洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。
5.再生
一般用缓冲液洗到平衡,可再次使用。
6.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,始终要避免柱子流干气泡进入。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
7.在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白,可以用2M NaCl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类,可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等,用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗,但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加,否则容易产生气泡。
清洗完毕后,用至少3倍缓冲液平衡柱子。
8.注意
在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干气泡进入。
9.去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除:
① 2倍柱体积的70%乙醇;
② 2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5;
③ 1倍柱体积4M尿素;
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl;
以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
10.消毒
用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积,初始缓冲液平衡柱子。
注意:上样之前,样品必须去除色素,否则色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用。
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